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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.85.2009.tde-19112009-100800
Documento
Autor
Nome completo
Beatriz Elane de Almeida
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2009
Orientador
Banca examinadora
Ribela, Maria Teresa de Carvalho Pinto (Presidente)
Bartolini, Paolo
Dalmora, Sergio Luiz
Título em português
Análise de luteotrofina humana e de gonadotrofina coriônica humana, recombinante e natural, por cromatografia  líquida de alta eficiência em fase reversa
Palavras-chave em português
hCG.
hLH
RP-HPLC
Resumo em português
Neste trabalho foram desenvolvidas condições específicas de RP-HPLC para análise de preparações recombinantes e naturais de hLH, de hCG, e de suas subunidades. O hLH e o hCG heterodimérico e suas subunidades e migraram com tempos de retenção (tR) significativamente diferentes, na seguinte ordem de hidrofobicidade crescente: -hCG < -hLH < hCG < hLH < -hCG < -hLH. Nestas condições, onze preparações foram estudadas: o Padrão Internacional recombinante hLH-WHO 96/602, uma preparação comercial recombinante, duas preparações hipofisárias altamente purificadas de hLH, uma preparação recombinante e duas preparações urinárias de hCG e quatro produtos urinários heterogêneos, contendo hLH + hFSH. Todas as preparações de hLH mostraram um tempo de retenção similar para o pico principal (tR = 38,35 ± 0,42 min; DPR = 1,1 %; n = 4 preparações), enquanto o pico principal do hCG migrou cerca de 4% mais rápido, quando comparado a este valor médio. Picos de hLH, hFSH e hCG foram também identificados nas preparações urinárias heterogêneas. O método foi validado para as sete preparações homogêneas, sendo a exatidão, precisão e sensibilidade calculadas com base na curva dose-resposta, altamente linear (r=0,99998; p<0,0001; n=20). A quantificação de diferentes gonadotrofinas nas preparações heterogêneas foi também realizada, embora com claras limitações de exatidão.
Título em inglês
ANALYSIS OF RECOMBINANT AND NATIVE HUMAN LUTROPIN AND HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN BY REVERSED-PHASE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Palavras-chave em inglês
hCG.
hLH
RP-HPLC
Resumo em inglês
Specific RP-HPLC conditions for the analysis of recombinant and native hLH and hCG preparations and of their subunits were set up. Heterodimeric hLH and hCG and their - and - subunits all migrated with significantly different retention times (tR) in the following order of increasing hydrophobicity: -hCG < -hLH < hCG < hLH < -hCG < -hLH. With basis on these conditions, a total of eleven preparations were studied: the International Standard of recombinant hLH-WHO 96/602, a commercial recombinant and two highly purified pituitary hLH, a recombinant and two urinary hCG preparations and four heterogeneous urinary products containing hLH + hFSH. All hLH preparations showed very similar retention times for the main peak (tR = 38.35 ± 0.42 min; RSD = 1.1 %; n = 4 preparations), while the hCG main peak ran about 4 % faster when compared to this average value. Human LH, hFSH and hCG peaks could also be identified in the heterogeneous urinary preparations. Quantitative analysis could be validated for the seven homogeneous preparations and accuracy, precision and sensitivity were calculated on the basis of a highly linear dose-response curve (r=0.99998; p<0.0001; n=20). Quantification of the differents gonadotropins in the heterogeneous urinary preparations was also carried out, though with clear accuracy limitations.
 
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Data de Publicação
2009-11-27
 
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