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Mémoire de Maîtrise
DOI
10.11606/D.87.2018.tde-22102018-152147
Document
Auteur
Nom complet
Douglas Borges de Figueiredo
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2014
Directeur
Jury
Gonçalves, Viviane Maimoni (Président)
Azzoni, Adriano Rodrigues
Barazzone, Giovana Cappio
Titre en portugais
Desenvolvimento do processo de purificação da proteína A de superfície de pneumococo do clado 4 (PspA4Pro).
Mots-clés en portugais
Streptococcus pneumoniae
Brometo de cetiltrimetilamônio
Cromatografia líquida preparativa
PspA
Purificação de proteínas
Resumé en portugais
A proteína A de superfície de pneumococo (PspA) é encontrada na superfície de todas as cepas de Streptococcus pneumoniae e candidata promissora para novas vacinas pneumocócicas. Foi desenvolvido um processo de purificação da PspA4Pro cujas etapas iniciais foram: ruptura da biomassa celular, precipitação do homogenato obtido com o detergente brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) e remoção do precipitado por centrifugação. Foram avaliadas cromatografias de troca iônica (aniônica, catiônica), afinidade por metais, interação hidrofóbica e mista de troca catiônica e hidrofóbica. Utilizando precipitação com CTAB, cromatografia de troca aniônica, crioprecipitação em pH4,0 e cromatografia de troca catiônica atingiu-se a pureza requerida de PspA4Pro (>95%) com recuperação entre 14% e 33%. O processo alcançou níveis aceitáveis de endotoxina no produto final e a PspA4Pro purificada foi reconhecida por anticorpos anti-PspA4, manteve sua atividade e sua estrutura secundária.
Titre en anglais
Development of the purification process of pneumococcal surface protein A clade 4 (PspA4Pro).
Mots-clés en anglais
Streptococcus pneumoniae
Cetyltrimethylammonium bromid
Pneumococcal surface protein A
Preparative liquid chromatography
Protein purification
Resumé en anglais
Pneumococcal surface protein A (PspA) is found in all Streptococcus pneumoniae strains and is a promising candidate to be used in new pneumococcal vaccines. A purification process for PspA4Pro which inicial steps were: cell disruption, precipitation of the homogenate with the cationic detergent cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) and pellet removal by centrifugation. The chromatographic techniques tested were ion exchange (anionic and cationic), immobilized metal affinity, hydrophobic interaction and mix mode with hydrophobic and cationic ligands. Using CTAB precipitation, anion exchange chromatography, crioprecipitation in pH4.0 and cation exchange chromatography the PspA reached the required purity (>95%) with recovery between 14% and 33% . The process reached acceptable levels of endotoxin in the final product and the purified PspA4Pro was recognized by anti-PspA4 antibodies and manteined its activity and secondary structure.
 
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Date de Publication
2018-10-22
 
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