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Doctoral Thesis
DOI
Document
Author
Full name
Noeli Maria Espindola
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2004
Supervisor
Committee
Vaz, Adelaide Jose (President)
Fernandes, Irene
Livramento, José Antonio
Machado, Luis dos Ramos
Takehara, Harumi Ando
Title in Portuguese
Caracterização de antígenos de cisticercos e sua aplicação para o diagnóstico da cisticercose humana
Keywords in Portuguese
Antígenos (Imunologia)
Cisticercose (Diagnóstico)
Doenças parasitárias
Immunodiagnosis
Neurocisticercose
Abstract in Portuguese
Larvas de Taenia crassiceps foram cultivadas in vitro por 144 h e deram origem a dois "pools" de antígenos de secreção e excreção (ES) nas 24 h (ES24) e 48 h (ES48), caracterizados como frações <30 kDa, que foram utilizados para a detecção de anticorpos em amostras de pacientes com neurocisticercose (NC) e em soro imune de coelho imunizados com antígenos de Taenia crassiceps (Tcra) e Taenia solium (Tso) com reatividade para os peptídeos 30-, 18- e 14-12- kDa. O ES48, pela sua maior reatividade com anticorpos anti-Tso, e os antígenes líquido vesicular de Tcra (LV-Tcra), líquido vesicular (LV-Tso), total (T-Tso) e de escólex (E-Tso) de Tso foram utilizados na produção de anticorpos monoclonais (AcMo). Os anticorpos monoclonais obtidos foram utilizados nos estudos de caracterização dos antígenos de Tcra e Tso, na pesquisa de anticorpos e antígenos em amostras de pacientes com NC. De um total de 24 clones obtidos, um anti-ES-Tcra, um anti-LV-Tcra, 3 anti-LV-Tso e 4 anti-T-Tso reconheceram os peptídeos 18- e 14-12- kDa de Tera e 14-12- kDa de Tso, os 3 anti-E-Tso reagiram apenas com peptídeos >45 kDa de Tso e os demais 5 anti-T-Tso e 7 anti-LV-Tso reconheceram apenas o 14-12 kDa de Tso, não mostrando reatividade cruzada com Tcra. O estudo imunoquímico do antígene LV-Tcra tratado por aquecimento, com NaBH4, TCA e ácido periódico por ELISA e imunoblot utilizando os AcMo anti-ES-Tcra, anti-LV-Tcra, um anti-LV-Tso e um anti-T-Tso, mostrou que houve redução na reatividade após o tratamento com TCA e ácido periódico, o que não ocorreu após o tratamento por aquecimento e NaBH4. Frações <20 kDa de Tcra foram purificadas com AcMo anti-Tcra e utilizadas na pesquisa de anticorpos anti-Tso em amostras de pacientes com NC. Os AcMo anti-ES-Tcra, anti-LV-Tcra, um anti-LV-Tso e um anti-T-Tso, todos com reatividade para Tcra e Tso foram utilizados na pesquisa de anticorpos em líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com NC por ELISA competitivo utilizando antígeno de Tcra e Tso. Os AcMo anti-Tera foram muito úteis na pesquisa de antígeno em LCR de pacientes com NC, com reatividade para peptídeos 30-, 18- e 14-12- kDa.
Title in English
Caracterização de antígenos de cisticercos e sua aplicação para o diagnóstico da cisticercose humana
Keywords in English
Antígenos (Imunologia)
Cisticercose (Diagnóstico)
Doenças parasitárias
Immunodiagnosis
Neurocisticercose
Abstract in English
Taenia crassiceps cysticerci were kept in vitro during 144 h. Excretory/Secretory (ES) antigens (peptides <30 kDa) were identified in 24 (ES24) and 48 h (ES48). ES peptides 30-, 18-and 14-12- kDa were recognized by polyclonal antibodies produzed in rabbits immunized with Taenia crassiceps (Tcra) and Taenia solium (Tso) antigens, and antibodies in samples of serum and cerebrospinal fluid (CSF) from patients with neurocysticercosi (NC). Monoclonal antibodies (MoAb) were prepared against ES-Tcra, Tcra vesicular fluid (VF-Tcra), Tso vesicular fluid (VF-Tso), Tso total (T-Tso) and Tso scolex (E-Tso) antigens. The MoAb were utilized in characterization of Tcra and Tso antigens, and in the antigens detection in samples of patients with NC. Twenty four MoAb were obtained, from which nine (1 anti-ES-Tra, 1 anti-VF-Tcra, 3 anti-VF-Tso and 4 anti-T-Tso) reacted with peptides 18- and 14-12- kDa in Tcra antigens, and peptide 14-12 kDa in Tso antigens. The MoAb maintained their reactivity towards VF-Tcra antigen treated with heat and alkaline borohydride and showed reduction after trichloroacetic acid and periodate oxidation treatments. Peptides <20 kDa in VF-Tcra antigen were purified by anti-Tcra MoAb and were used to detect antibodies in serum and CSF taken from patients with NC. Anti-Tcra and anti-Tso MoAb with reactivity for Tera and Tso antigens were used to detect antibodies, and anti-Tcra MoAb to detect antigens in serum and CSF from patients with NC.
 
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Publishing Date
2019-11-28
 
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