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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.9.2016.tde-26022016-090754
Document
Author
Full name
Wesley Soares Cruz
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2015
Supervisor
Committee
Farsky, Sandra Helena Poliselli (President)
Kuno, Rubia
Oliveira, Tiago Franco de
Title in Portuguese
Efeito da exposição in vitro à bifenila policlorada nº 126 em células 3T3-L1
Keywords in Portuguese
3T3-L1
Obesidade
PCB 126
Poluentes
Abstract in Portuguese
A bifenila policlorada n° 126 (3,3',4,4',5-Penta-cloro-bifenil, PCB126) é um poluente orgânico persistente (POP), tóxico para os seres vivos. Recentemente, a associação entre a exposição aos POPs e doenças metabólicas têm sido descrita. No entanto, os mecanismos desta toxicidade não estão esclarecidos. Desta forma, este trabalho visou elucidar os efeitos da exposição ao PCB126 sobre pré-adipócitos da linhagem 3T3-L1, diferenciados ou não, focando nos mecanismos de morte celular, proliferação, diferenciação e metabolismo. O PCB 126 foi diluído em DMSO (0,13%). Células 3T3-L1 foram mantidas em meio Dulbecco's modified Eagle's (DMEM, 5% de CO2 a 37ºC) e sua diferenciação foi realizada pela incubação com solução contendo coquetel adipogênico durante 10 dias. As células foram incubadas com diferentes concentrações de PCB126, DMSO (0,13%) ou DMEM. Células não diferenciadas foram empregadas em ensaios de viabilidade, morte, proliferação, ciclo celular, fragmentação do DNA (citometria de fluxo) e ensaios de produção de espécies reativas de oxigênio (ROS, espectrofotometria de fluorescência). Células diferenciadas foram empregadas para quantificação dos mediadores inflamatórios (ELISA), acúmulo de triglicérides intracelulares (Oil red, microscopia de luz), produção de óxido nítrico (NO, reação de Greiss), expressão do receptor de aril hidrocarboneto (AhR, WB) e do proliferador de peroxissoma (PPAR-γ, WB). Os resultados obtidos mostraram que a exposição ao PCB126 (10, 30 ou 100µM; 24, 48 ou 72 h) não alterou a viabilidade e proliferação celular; reduziu a porcentagem de células em apoptose (30, 100µM; 24 ou 72 h); não alterou o ciclo celular (10, 30 ou 100µM; 24 ou 72 h); induziu a fragmentação do DNA (10, 30 ou 100µM; 24h); não induziu a geração de ROS (30, 100µM; 24 ou 72 h); induziu a produção de NO (300µM; 24 ou 72h); não alterou a secreção do fator quimiotáxico para monócito (MCP-1); aumentou a secreção do fator de necrose tumoral (TNF-α; 100 ou 300µM, 72 h) e da interleucina 12 (IL-12; 300µM, 72 h); reduziu a secreção de interleucina 1β (IL-1β, 300 µM, 72 h) e de interleucina 10 (IL-10; 300µM; 24h, 100 ou 300µM; 48 h; 100µM, 72 h); aumentou a expressão de PPARγ (100 ou 300µM, 24h; 300µM, 72h) e de AhR (300µM, 72h); aumentou a concentração de triglicérides intracelulares (100 ou 300µM; 24, 48 ou 72h). Em conjunto, os resultados obtidos mostram as ações diretas do PCB126 em células 3T3-L1 envolvidas na adipogênese, o que reforça, embora que em ensaios in vitro, o papel desta classe de poluentes na obesidade.
Title in English
In vitro exposure effect of polychlorinated biphenyl n° 126.
Keywords in English
3T3-L1
Obesity
PCB 126
Pollutants
Abstract in English
The polychlorinated biphenyl (PCB) 126 is a persistent organic pollutant and toxic to human being. The association between exposition to POPs and metabolic diseases has been described. Nevertheless this toxicity mechanism is not yet elucidated. This way this work aim to elucidate the exposure over pre adipocytes 3T3-L1 line to PCB 126, differentiated or not, focused on cellular death mechanisms, proliferation, differentiation and metabolism. The PCB126 was diluted in DMSO (0,13%). 3T3-L1 cells were maintained in Dulbecco´s modified Eagle´s medium (DMEM, 5% CO2 at 37º) and the differentiation process was performed by incubation with adpogenic cocktail solution by 10 days. The cells were incubated with different concentration of PCB126, DMSO (0,13%) or DMEM. Cells not differentiated were used on viability assays, death, proliferation, cell cycle and DNA fragmentation (flow cytometry) and reactive oxygen species production assay (ROS, fluorescence spectrophotometry). Differentiated cells were used to quantify inflammatory mediators (ELISA), Intracellular triglycerides accumulation (Oil red staining, light microscopy), nitric oxide production (NO, Greiss reaction), aril hydrocarbon receptor expression (AhR, Western Blot) and Peroxisome proliferator receptor gamma (PPAR-y, Western Blot). The obtained results showed that exposure to PCB126 (10, 30 or 100 µM; 24, 48 or 72 hours) did not interfere on cellular viability and proliferation; reduced the cells percentage in apoptosis (30, 100 µM; 24 or 72h); did not interfere on cellular cycle (10, 30 or 100 µM; 24 or 72h); induced DNA fragmentation (10, 30 or 100 µM; 24h); did not induced ROS generation (30, 100 µM; 24 or 72h); induced the production of NO (300 µM; 24 or 72h); did not alter the secretion of monocyte chemoattractant protein (MCP-1); enhanced the secretion of tumoral necrosis factor (TNF-α; 100 or 300 µM; 72h) and interleukin 12 (IL12; 300 µM; 72h); reduced secretion of interleukin 1β (IL1β 300 µM; 72h) and interleukin 10 (IL10; 300 µM; 24h; 100 or 300 µM; 48h; 100 µM; 72h); increased PPAR-y expression (100 or 300 µM; 24h; 300 µM; 72h) and AhR (300 µM, 24h); increased intracellular triglycerides concentration (100 or 300 µM, 24, 48 or 72h). In summary the results show direct actions of PCB126 in 3T3-L1 cells evolved on adipogenesis, reinforcing, although in vitro, the role of this pollutant class on obesity.
 
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Publishing Date
2016-03-10
 
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