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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.99.2020.tde-03022020-111800
Document
Author
Full name
Fernanda Narangeira de Araújo
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2019
Supervisor
Committee
Goto, Hiro (President)
Sato, Maria Notomi
Brito, Cyro Alves de
Ekman, Luciana Regina Meireles Jaguaribe
Title in Portuguese
Interação do fator de crescimento insulina símile-I e citocinas Th1 e Th2 na infecção de macrófago murino por Leishmania (Leishmania) amazonensis
Keywords in Portuguese
Citocinas
Fator de crescimento Insulin-Like I
Leishmania
Abstract in Portuguese
Citocinas definidoras do perfil Th1 e Th2 influenciam a evolução da infecção nas leishmanioses e também a expressão do fator de crescimento insulina-símile I (IGF-I) em macrófagos. Nosso grupo mostrou anteriormente que IGF-I constitui um fator efetor da citocina IL-4 durante a infecção por Leishmania major. No entanto, como a resposta pode ser diferente dependendo da espécie de Leishmania, propomos analisar os efeitos das citocinas IL-4, IL-13 e IFN-? na expressão de IGF-I e seu receptor e sua correlação com o parasitismo na infecção de células RAW com Leishmania (Leishmania) amazonensis. A linhagem macrofágica RAW 264.7 (5x105 células) foi infectada com promastigotas de L. (L.) amazonensis e tratadas com IL-4, IL-13 e IFN- ? por 24, 48 e 72 horas. Avaliamos a expressão de mRNA de Igf-I e seu receptor por RealTime PCR quantificação relativa, e também o parasitismo, a produção de óxido nítrico e a atividade da arginase. Em relação as citocinas do perfil Th2, IL-4 e IL-13, foi observado um aumento do parasitismo associado a um aumento da expressão do IGF-I e um aumento da atividade da arginase. Após estímulo com a citocina IFN-?, observamos o aumento do parasitismo, com aumento da produção de óxido nítrico e uma diminuição da expressão de IGF-I. Na avaliação do receptor de IGF-I, observamos uma diminuição na expressão do mRNA de Igf-IR em todos os grupos avaliados. O silenciamento do IGF-I por RNA de interferência (siRNA) resultou na diminuição da expressão do mRNA em 90%. Observamos uma diminuição significativa do parasitismo nos grupos com siRNA quando comparado com o controle sem siRNA. Na avaliação das citocinas após silenciamento do IGF-I, todos os grupos tratados com siRNA e estimulados com citocinas apresentaram diminuição do parasitismo em relação aos seus controles sem siRNA. Na infecção por L. amazonensis, a citocina do perfil Th1, IFN-?, apresenta um efeito diferente no parasitismo quando comparado com a infecção por L. major. Nossos resultados sugerem que o IGF-I tem efeito direto no parasitismo e que mesmo com os estímulos das citocinas, a presença do IGF-I é necessária para promover a suscetibilidade da infecção.
Title in English
Interaction of insulin-like growth factor I and Th1 and Th2 cytokines in murine macrophage infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis
Keywords in English
Cytokines
Insulin-like Growth factor I
Leishmania
Abstract in English
Th1 and Th2 profile-defining cytokines influence the evolution of leishmaniasis infection and also the expression of insulin-like growth factor I (IGF-I) in macrophages. Our group has previously shown that IGF-I is an effector factor of cytokine IL-4 during Leishmania major infection. However, as the response may differ depending on the species of Leishmania, we propose to analyze the effects of cytokines IL-4, IL-13 and IFN-? on the expression of IGF-I and its receptor and its correlation with parasitism in the infection of RAW cells with Leishmania (Leishmania) amazonensis. The macrophage lineage RAW 264.7 (5x105 cells) was infected with L. (L.) amazonensis promastigotes and treated with IL-4, IL-13 and IFN- ? for 24, 48 and 72 hours. We evaluated the expression of Igf-I mRNA and its receptor by RealTime PCR relative quantification, parasitism, nitric oxide production and arginase activity. Regarding Th2 cytokines, IL-4 and IL-13, an increase in parasitism associated with increased IGF-I expression and increased arginase activity was observed. After stimulation with cytokine IFN-?, observe a increase parasitism, increase nitric oxide production and decrease IGF-I expression. In the IGF-I receptor evaluation, we observed a decrease in Igf-IR mRNA expression in all discount groups. IGF-I silencing by interfering RNA (siRNA) resulted in decreased mRNA expression (> 90%). Regarding the parasitism of these cells, we observed a significant decrease in parasitism in the siRNA groups when compared to the control without siRNA at 24 and 48 hours. In assessing the participation of Th1 and Th2 cytokines in parasitism after IGF-I silencing, all siRNA-treated and cytokine-stimulated groups showed decreased parasitism relative to their controls without siRNA. In L. amazonensis infection, the Th1 profile cytokine, IFN-?, has a different effect on parasitism when compared to L. major infection. Our results suggest that IGF-I has a direct effect on parasitism and that even with cytokine stimuli, the presence of IGF-I is necessary to promote susceptibility of infection.
 
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Release Date
2022-02-02
Publishing Date
2020-02-05
 
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