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Thèse de Habilitation à Diriger des Recherches
DOI
10.11606/T.46.2013.tde-16082013-151347
Document
Auteur
Nom complet
Walter Colli
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 1971
Jury
Cilento, Giuseppe (Président)
Bacila, Metry
Brentani, Ricardo Renzo
Lima, Lucio Penna de Carvalho
Tastaldi, Henrique
Titre en portugais
Genes redundantes responsáveis pela síntese de RNA ribossômico em Bacillus subtilis: I - Relações topológicas no cromossomo; II - Purificação sob a forma de híbridos DNA-RNA
Mots-clés en portugais
Bacillus subtilis
Genes de RNA ribossômico
Purificação de genes
Redundância gênica
RNA (Síntese)
Resumé en portugais
1) A técnica, já descrita na literatura, de separação de DNA "single-stranded" e DNA "double-stranded" através de gradientes de densidade de Cs2S04 - Hg2+ foi pela primeira vez utilizada com sucesso para separar híbridos DNA-RNA das duas formas de DNA. Embora os experimentos tivessem sugerido que a eficiência da separação dependa da predominância das porções híbridas da molécula, não houve a preocupação neste trabalho de se estabelecer a possível correlação entre densidade de flutuação, pêsos moleculares e porcentagens de estruturas híbridas. 2) Os experimentos demonstraram, através dessa técnica, que os genes responsáveis pela síntese de rRNA (5S, 16S e 23S) se alternam no cromossomo de Bacillus subtilis formando grupos de genes separados por segmentos não homólogos a rRNA, cada grupo contendo um gene para cada espécie de rRNA. Não houve possibilidade de se excluir três dos possíveis modelos de arranjo entre êsses genes em virtude da falta de informação a respeito dos segmentos de DNA, inter-grupo e/ou intra-grupo, não homólogos a rRNA. 3) A mesma técnica possibilitou o isolamento de fragmentos de DNA "single-stranded" contendo informação para a síntese de rRNA. A purificação obtida foi de aproximadamente 80 vêzes, indicando uma porcentagem de pureza de 30%. Fizeram-se algumas especulações a respeito da natureza dos segmentos inter-gênicos que poderiam representar sequências nucleotídicas responsáveis pelo contrôle específico da transcrição de rRNA. Os grupos de genes isolados em fragmentos de DNA de pêso molecular de aproximadamente 2,0x 106 representariam então verdadeiros "operons" ribossômicos. 4) O isolamento dos genes responsáveis pela síntese de rRNA permitirá, entre outros, alguns estudos relacionados como mecanismo da transcrição: a) A reassociação dos fragmentos isolados com suas sequências complementares permitirá a obtenção de um "template" específico para a RNA polimerase e o subsequente estudo da possível existência de fatôres citoplasmáticos específicos de contrôle positivo da transcrição em Bacillus subtilis. b) A ordem dos genes ribossômicos em relação à extremidade 3\' da molécula poderá ser estudada através de hibridização controlada seguida de hidrólise catalisada por exonucleases específicas. c) O isolamento de fragmentos de tamanhos diversos permitirá, através da técnica de transformação, o estudo das relações topológicas entre os genes para RNA ribossômico e os genes responsáveis pela síntese de proteínas ribossômicas. 5) As técnicas desenvolvidas nêste trabalho poderão ser aplicadas para o isolamento de qualquer gene desde que se obtenha em estado puro o produto de sua transcrição.
Titre en anglais
Redundant genes coding for ribosomal RNA synthesis in Bacillus subtilis: I - Topological relationships in the chromosome. II - Purification as DNA-RNA hybrids
Mots-clés en anglais
Bacillus subtilis
Genes of ribosomal RNA
Purification genes
Redundancy gene
RNA (Synthesis)
Resumé en anglais
Abstract not available.
 
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Date de Publication
2013-08-20
 
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